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    當前位置:首頁新聞中心再擴增SCFvVLCDR3基因文庫

    再擴增SCFvVLCDR3基因文庫

    更新時間:2013-03-02點擊次數(shù):1270

    [器材和試劑]
    ● PCR試劑和設(shè)備
    ● Winard PCR純化試劑盒(Promega)
    ● 定制的DNA引物
    ● VL—NotI引物 (5,—GAG TCA TTC TCG ACT TGC GGC CGC ACC TAG CAC GGT CAG CTT GGT CCC TCC GCC GAA CAC CCA ACC—3’)
    ● LMB3引物
    ● 用于scFv基因文庫限制性消化的試劑和設(shè)備
    ● 已擴增的scFv基因文庫DNA

    [方法]
    1.配制4個50ul PCR反應混合液, 包含:
    ● 去離子水,35.5ul
    ● 20×dNTP(每種5mmol/L),2.5ul
    ● 10×Vent聚合酶緩沖液,5.0ul
    ● LMB3引物 (10pmol/ul), 2.5ul
    ● VL—NotI引物 (10pmol/ul), 2.5ul
    ● scFV基因模板DNA(100ng), 1ul
    ● VentDNA聚合酶(2單位),1.0ul
    2.在有加熱蓋的熱循環(huán)儀內(nèi),加熱反應混合液到94℃5分鐘。
    3.以94℃1分鐘、42℃1分鐘、72℃2分鐘的條件共循環(huán)30次,擴增VL基因。
    4.用Winard PCR純化試劑盒純化PCR產(chǎn)物。
    5.用NcoI和NotI消化PCR產(chǎn)物。