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    連接scFv和載體DNA并轉(zhuǎn)化大腸桿菌

    更新時間:2013-03-02點擊次數(shù):1319

    [器材和試劑]
    ● 去離子水(millipore)
    ● T4DNA連接酶和10×連接酶緩沖液(NEB)
    ● 16℃水浴
    ● 消化的scFv文庫DNA
    ● pHENl DNA,用NcoI和NotI消化(100ng/ul)
    ● 電感受態(tài)大腸桿菌TGl細胞(Strat aeene)
    ● 用于將scFv文庫電轉(zhuǎn)化到大腸桿菌TGl株的試劑和設(shè)備

    [方法]
    1.配制1個50ul連接混合液,包含:
    ● 10×連接緩沖液,5uI
    ● 水,16ul
    ● NcoI和NotI消化的pHENl(100g/ul), 20ul
    ● VcoI和NotI消化的scFv文庫(100g/ul), 7ul
    ● T4 DNA連接酶(400U/ul),2ul
    2.16℃孵育反應(yīng)液過夜。
    3.乙醇沉淀DNA并用70%乙醇洗滌沉淀1次。
    4.重懸DNA于10ul水中。
    5.用4份相同的2.5ul的DNA分別電轉(zhuǎn)化到電感受態(tài)大腸桿菌TGl細胞中。
    6.確定文庫容量,并將菌文庫材抖儲存于-70℃。