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    酶活性分析法檢定蛋白質(zhì)

    更新時(shí)間:2013-01-16點(diǎn)擊次數(shù):1191

    方法步驟:
    1) 吸取20 μL 的蛋白質(zhì)樣本,小心注入微量滴定盤中,避免氣泡產(chǎn)生。
    2) 每一樣品槽加入200 μL 基質(zhì)液,混合均勻;可用燒熱的接種環(huán)去除氣泡。
    3) 靜置約1~2 min,顏色開(kāi)始加深,然后加入30 μL 終止液。 反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短,要以樣本中的酶活性大小來(lái)做調(diào)整。因?yàn)槲覀冎粶y(cè)定色析法各分劃的相對(duì)酶活性,因此并不加終止液。
    4) 以ELISA 光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)415 nm 的吸光值。

    酶活性單位的測(cè)定:
    a. 以上步驟,只可測(cè)定GUS 活性的相對(duì)大小,對(duì)色析法所得到的各個(gè)分劃進(jìn)行偵測(cè),相當(dāng)方便,但并非酶活性單位的測(cè)定方法。
    b. 若要測(cè)定酶的活性單位,要使用zui適當(dāng)?shù)拿赣昧浚姑冈诜磻?yīng)一段固定的時(shí)間后,其生成物的呈色吸光度,落在光度計(jì)的可測(cè)范圍的內(nèi);然后計(jì)算此段時(shí)間內(nèi),每分鐘所產(chǎn)生的吸光度增加量,轉(zhuǎn)換成生成物的莫耳數(shù),即可求得其真正的活性單位。
    c. 因此酶的活性單位定義為:每分鐘所能催化生成物的 μmole 數(shù)。