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    連接scFv和載體DNA并轉化大腸桿菌,構建scFv突變文庫

    更新時間:2013-01-14點擊次數(shù):1359

    [方法]
    1.配制1個50ul連接混合液,包含:
    ● 10×連接緩沖液,5uI
    ● 水,16ul
    ● NcoI和NotI消化的pHENl(100g/ul), 20ul
    ● VcoI和NotI消化的scFv文庫(100g/ul), 7ul
    ● T4 DNA連接酶(400U/ul),2ul
    2.16℃孵育反應液過夜。
    3.乙醇沉淀DNA并用70%乙醇洗滌沉淀1次。
    4.重懸DNA于10ul水中。
    5.用4份相同的2.5ul的DNA分別電轉化到電感受態(tài)大腸桿菌TGl細胞中。
    6.確定文庫容量,并將菌文庫材抖儲存于-70℃。