黄色免费网站,黄色片免费观看视频,凹凸AV网站,人妻熟妇91Por

  • <samp id="yumua"><tfoot id="yumua"></tfoot></samp>
    <ul id="yumua"><pre id="yumua"></pre></ul>
    <blockquote id="yumua"><dl id="yumua"></dl></blockquote>
  • <blockquote id="yumua"><tfoot id="yumua"></tfoot></blockquote><samp id="yumua"></samp>

    新聞中心

    News Center

    當(dāng)前位置:首頁新聞中心大規(guī)模連接及純化連接后的DNA

    大規(guī)模連接及純化連接后的DNA

    更新時(shí)間:2013-01-06點(diǎn)擊次數(shù):1497

    [方法]
    1.建立以下連接反應(yīng):
    ●載體DNA(pG6A ppG6B,pG6C)(10ug) x ul
    ●cDNA 片段(3~5ug) y ul
    ●10×連接緩沖液40ul
    ●T4DNA連接酶(6WeissU/ul)5ul
    ●水400ul
    2.在16℃過夜孵育。
    3.在70℃孵育30分鐘,使T4 DNA連接酶變性。
    4.加1體積的乙醇并振蕩45秒,在14000g微離心機(jī)中離心10分鐘,然后將上清液轉(zhuǎn)移到另一新的微離心管中。
    5.加1體積的24/1(體積比)氯仿/異戊醇并振蕩45秒,在14000g微離心機(jī)中離心5分鐘,然后將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的微離心管中。
    6.重復(fù)第5步。
    7,(a)加0,1體積的5mol/LNaClO4和1體積的異丙醇,振蕩并在14000g、14℃微離心機(jī)中離心30分鐘。小心地去除上清液,用250ul 70%的乙醇洗沉淀物(在每次洗完之后在14000g室溫下離心5分鐘)??焖俑稍锍恋砦锶缓笤?0~50ul的水中打散沉淀物,將DNA儲存在一20℃下。
    (b)另一方面,經(jīng)微過濾和濃縮進(jìn)行純化:將上清液加到微過濾裝置中,在3000g微離心機(jī)中旋轉(zhuǎn)15~20分鐘,除去洗出液。然后加350ul的水再在3000g旋轉(zhuǎn)15~20分 鐘。重復(fù)此步3次,除去微過濾裝置中的上層部分,將余下的取出放置到另一新的微離心管中,振蕩并在14000g旋轉(zhuǎn)5秒,以恢復(fù)離心管底部的DNA(40—50ul),zui后將DNA儲存在-20℃。