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    再擴(kuò)增scFv基因文庫(kù)以添加限制性位點(diǎn)進(jìn)行克隆

    更新時(shí)間:2012-12-29點(diǎn)擊次數(shù):1099

    [方法]
    1.在0.5ml微量離心管中,配制兩個(gè)50/z1PCR反應(yīng)混合液(1個(gè)用于VH—VκscFv文庫(kù), 另1個(gè)用于Vu—Vλ scFv文庫(kù)),其中含有:
    ● 水,36.5//1
    ● 10XTag緩沖液,5.0ul
    ● 20XdNTP, 2.5ul
    ● 正向引物,2.0ul
    ● 反向引物,2.0ul
    ● scFv基因文庫(kù)(約long), 1.0ul
    2.在熱循環(huán)儀格內(nèi)加熱反應(yīng)管到94℃,5分鐘。如果沒(méi)有加熱蓋,則滴加1滴輕質(zhì)礦物油覆蓋反應(yīng)液。
    3.加入1.0ul(5單位)TdQDNA聚合酶。
    4.以94℃ 1分鐘、55℃ 1分鐘、72℃ 1分鐘的條件共循環(huán)25次,擴(kuò)增scFv基因。
    5.用Wizard PCR純化試劑盒,純化PCR產(chǎn)物。