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    N-乙酰-DL-絲氨酸說明書,N-乙酰-DL-絲氨酸資料

    發(fā)布時(shí)間:2013/3/7點(diǎn)擊次數(shù):683

    [器材和試劑]
    ● PCR試劑和設(shè)備。除了用Taq聚合酶緩沖液替代Vent聚合酶緩沖液。各自在適宜緩沖液中保存的Tdg聚合酶,均可使用。
    ● V區(qū)特異性正向 (3’)(JκFORNot和JλFORNot)和反向(5’) (VHBACKSfi PCR引物
    ● 已組裝的scFv基因文庫
    ● Wizard PCR純化試劑盒(Promega)

    [方法]
    1.在0.5ml微量離心管中,配制兩個(gè)50/z1PCR反應(yīng)混合液(1個(gè)用于VH—VκscFv文庫, 另1個(gè)用于Vu—Vλ scFv文庫),其中含有:
    ● 水,36.5//1
    ● 10XTag緩沖液,5.0ul
    ● 20XdNTP, 2.5ul
    ● 正向引物,2.0ul
    ● 反向引物,2.0ul
    ● scFv基因文庫(約long), 1.0ul
    2.在熱循環(huán)儀格內(nèi)加熱反應(yīng)管到94℃,5分鐘。如果沒有加熱蓋,則滴加1滴輕質(zhì)礦物油覆蓋反應(yīng)液。
    3.加入1.0ul(5單位)TdQDNA聚合酶。
    4.以94℃ 1分鐘、55℃ 1分鐘、72℃ 1分鐘的條件共循環(huán)25次,擴(kuò)增scFv基因。
    5.用Wizard PCR純化試劑盒,純化PCR產(chǎn)物。

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